沉默羊传染性脓疱皮炎病毒DNA聚合酶基因的RNAi载体的构建

李姗姗; 潘求真; 崔玉东; 连正兴

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沉默羊传染性脓疱皮炎病毒DNA聚合酶基因的RNAi载体的构建

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为了构建用于沉默羊传染性脓疱皮炎病毒(Orf virus,ORFV)DNA聚合酶基因的2种载体,试验选择病毒复制所必需的DNA聚合酶基因作为干扰靶基因,并设计靶基因的扩增引物,经PCR扩增后测序;随后,与Check2载体分别经PmeⅠ和NotⅠ双酶切,酶切后连接产生Check2-靶基因(Check2-D)重组质粒;然后,利用公用网站按照RNAi序列设计的原则,设计RNAi靶点序列并合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经XhoⅠ和HpaⅠ酶切后的pll3.7载体连接产生pll3.7-shRNA质粒;最后,利用磷酸钙法进行pll3.7-shRNA质粒和Check2-D质粒共转染293T细胞,利用双荧光检测系统试剂盒检测其RNA干扰效果。结果表明:成功构建了pll3.7-shRNA质粒和Check2-靶基因重组质粒,干扰效果最好,可达到91.0%。

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来源
《黑龙江畜牧兽医》 |2012年第10期|14-17|共5页
作者
李姗姗; 潘求真; 崔玉东; 连正兴;
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作者单位

黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院;

黑龙江大庆163319;

中国农业大学动物科技学院;

北京100094;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因理论;
关键词
DNA聚合酶基因; RNA干扰; pll3; 7载体; Check2载体;

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