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His-FemA融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达

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目的构建His标签的金黄色葡萄球菌甲氧西林耐药相关蛋白FemA的融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌中表达,为进一步研究femA基因的生物学功能和临床应用奠定基础。方法根据GenBank中金黄色葡萄球菌femA基因序列,利用Primer Premier 5.0设计PCR引物,并在引物的5'加入BamHI及SalI酶切位点;以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模版,PCR扩增出femA基因片段。将目的 DNA片段及质粒pQE30分别进行双酶切、连接并转化大肠埃希菌DH5α;阳性克隆以PCR、双酶切及测序进行鉴定。将鉴定正确的pQE30-femA重组质粒转化大肠埃希菌JM109,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达His-femA融合蛋白;采用SDS-PAGE及Western blot分析对表达蛋白进行验证。结果经PCR、双酶切鉴定及序列测定,证实重组质粒pQE30-femA构建成功;重组质粒pQE30-femA转化大肠埃希菌JM109经IPTG诱导后,SDS-PAGE和Western blot分析显示表达出53 kD目的蛋白;经Bandscan软件分析,目的蛋白质在4 h的表达量占细胞总蛋白的27.5%。结论成功构建了His-FemA原核表达载体(pQE30-femA),并在大肠埃希菌中高效表达。

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来源
《中国微生态学杂志》 |2012年第10期|878-882|共5页
作者
邹明祥; 李军; 邬国军; 武文君; 张宁洁; 刘文恩; 范学工;
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作者单位

中南大学湘雅医院检验科;

湖南长沙410008;

中南大学基础医学院微生物学系;

湖南长沙410078;

河南中医学院第一附属医院检验科;

河南郑州450000;

中南大学湘雅医院感染病科;

湖南长沙410008;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类 R378.11;
关键词
金黄色葡萄球菌; femA基因; 原核表达; 融合蛋白;

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