水貂阿留申病毒串联表位重组抗原的表达及血清学初步评价

秦飞燕; 孙杰; 马凡舒; 王洋; 柏玲; 张蕾; 闫喜军

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为探究水貂阿留申病毒(ADV)VP2主要抗原表位在水貂阿留申病血清学诊断中的作用,本试验将VP2蛋白主要抗原区的表位基因用柔性肽串联连接,将其克隆到表达载体pET-30a(+)中进行原核表达,并对诱导条件进行优化。利用Ni-NTA His-Bind纯化系统对融合蛋白进行纯化,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物,并将融合蛋白作为检测抗原进行CIEP试验。结果显示,融合蛋白在IPTG终浓度为1mmol/L、37℃诱导表达4h,蛋白表达量最高,其大小约为30000,以可溶性表达形式为主;融合蛋白能与6×His单克隆抗体及ADV多克隆抗体发生特异性反应,说明该蛋白具有较好的反应原性;且该蛋白作为对流免疫电泳技术(CIEP)检测抗原与ADV阳性血清之间产生了明显的沉淀线,证实了该蛋白作为CIEP检测抗原的可能性。以纯化后的重组蛋白为抗原初步建立的间接ELISA方法具有较高的准确性。结果表明该蛋白具有良好的血清学检测价值,为水貂阿留申病血清学诊断方法的建立奠定了基础。

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来源
《中国兽医学报》 |2019年第11期|2135-2139|共6页
作者
秦飞燕; 孙杰; 马凡舒; 王洋; 柏玲; 张蕾; 闫喜军;
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作者单位

中国农业科学院特产研究所特种经济动物分子生物学国家重点实验室/农业部经济动物疫病重点实验室;

吉林长春130122;

河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室;

河南郑州450002;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类家畜病毒学;
关键词
阿留申病毒; VP2蛋白; 表位基因; 原核表达; CIEP; ELISA;

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