携带红色荧光蛋白报告基因的重组腺病毒载体的构建

卢建溪; 阳莉; 钱师宇; 王强

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携带红色荧光蛋白报告基因的重组腺病毒载体的构建

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目的采用体外连接技术构建含红色荧光蛋白(RFP)报告基因的重组腺病毒载体,为基因治疗与基因疫苗研究提供重要工具。方法将pTurbo RFP-N上的含红色荧光蛋白基因片段,经酶切连接定向克隆至转移载体pShuttle上,构成重组质粒pShuttle-TurboRFP-N。用I-CeuI/PI-SceI双酶切重组质粒pShuttle-TurboRFP-N和骨架质粒pH5′040 pkGFP-II,回收目的片段,连接,获得重组腺病毒载体pH5.′040.CMV.RFP-N。将其线性化后,经脂质体介导转染至AD293细胞内包装出重组腺病毒颗粒。通过荧光显微镜观察其在AD293细胞内的包装效率和RFP表达情况。扩增并再次感染AD293细胞检测病毒颗粒感染能力,并测定其生物活性及滴度。结果经酶切鉴定,证明已正确构建重组腺病毒载体AdH5.′040.CMV.RFP-N;经AD293细胞包装成具有感染性的病毒颗粒,并能在真核细胞中高效表达目的基因;扩增纯化后获得重组腺病毒颗粒数为3.6×1012vp/mL,滴度达1×1010pfu/mL。结论成功构建了携带红色荧光蛋白报告基因的重组腺病毒载体,并能够在AD293细胞中高效地表达,为基因治疗与基因疫苗研究提供重要工具。

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来源
《中国微生态学杂志》 |2011年第8期|677-680|共4页
作者
卢建溪; 阳莉; 钱师宇; 王强;
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作者单位

中山大学附属第三医院疫苗研究所;

广东广州510630;

暨南大学医学院;

广东广州510632;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类目的基因的获得;
关键词
腺病毒载体; 红色荧光蛋白; 基因重组;

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