CRISPR/Cas9介导的LATS1/2敲除抑制卵巢癌细胞ES-2增殖

林仙德; 胡灵灵; 陈子彦; 胡汉寅; 杨柳青; 王卓文; 钱若文轩; 刘胜兵; 潘巍巍

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CRISPR/Cas9介导的LATS1/2敲除抑制卵巢癌细胞ES-2增殖

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Hippo信号通路在哺乳动物肝脏发育、动态平衡、再生和疾病中发挥非常重要的作用。大肿瘤抑制基因1/2(large tumor suppressor 1/2,LATS1/2)激酶是Hippo信号通路的关键激酶,可以磷酸化YES相关蛋白(yes-associated protein,YAP),从而调节YAP的核质定位和降解。本文采用CRISPR/Cas9方法构建慢病毒介导的Last1/2基因敲除的载体,通过包装、感染和嘌呤霉素筛选,获得LATS1/2部分敲除的人卵巢癌ES-2和H08910细胞,免疫印迹方法检测LATS1/2表达明显减少。细胞增殖实验检测LATS1/2缺失明显抑制ES-2和HO8910细胞增殖。软琼脂克隆形成实验表明,LATS1/2缺失抑制卵巢癌ES-2细胞的克隆形成能力。细胞划痕和Transwell实验证明,LATS1/2缺失明显抑制卵巢癌ES-2细胞迁移。流式细胞检测发现,LATS1/2敲除促进卵巢癌ES-2细胞凋亡并影响细胞周期。裸鼠成瘤实验表明,LATS1/2缺失明显抑制体内肿瘤组织增殖。分子机制研究表明,LATS1/2敲除促进卵巢癌ES-2细胞中胶原I型α1(collagen type Iα1,ColIα1)基因表达量增加,在卵巢癌ES-2细胞中同时敲除LATS1/2和COL1A1,可以促进细胞克隆形成。综上结果,人卵巢癌ES-2细胞中LATS1/2缺失能促进COL1A1表达增加,从而抑制细胞增殖、转移和克隆形成,并影响细胞周期和促进细胞凋亡。

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来源
《中国生物化学与分子生物学报》 |2019年第5期|565-574|共10页
作者
林仙德; 胡灵灵; 陈子彦; 胡汉寅; 杨柳青; 王卓文; 钱若文轩; 刘胜兵; 潘巍巍;
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作者单位

嘉兴学院医学院生物教研室;

浙江嘉兴314001;

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正文语种 chi
中图分类卵巢肿瘤;
关键词
大肿瘤抑制基因1/2(LAST1/2); 卵巢癌; 细胞增殖; 凋亡;

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