拟蜘蛛拖丝蛋白基因在小鼠颗粒细胞中的整合及其鉴定

张滕子; 王春生; 李晶; 宁方勇; 朴善花; 安铁洙

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拟蜘蛛拖丝蛋白基因在小鼠颗粒细胞中的整合及其鉴定

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为了探讨拟蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体（2S）在小鼠颗粒细胞基因组中整合和建立转拟蜘蛛拖丝蛋白基因的小鼠颗粒细胞系的可能性,试验将在前期工作中人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S连接到具有CMV启动子、IRES序列和GFP报告基因的表达载体,并转染小鼠颗粒细胞。结果表明：原代培养的幼鼠卵巢的颗粒细胞在培养后的第4天达到85%汇合,继代培养1-7代时每代达到85%的汇合时间约为3 d,细胞的形态与原代培养细胞相似,呈现多角形或梭形;筛选阳性细胞的最佳G418浓度为500μg/mL;将线性化的CMV-2S-pIRES2-EGFP转染颗粒细胞,再用500μg/mLG418筛选12 d后仍有存活细胞,但是续培养细胞的增殖能力逐渐丧失;经PCR鉴定,阳性细胞扩增出目的条带。

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来源
《黑龙江畜牧兽医》 |2011年第4期|1-3|共4页
作者
张滕子; 王春生; 李晶; 宁方勇; 朴善花; 安铁洙;
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作者单位

东北林业大学生命科学学院;

黑龙江哈尔滨150040;

东北农业大学动物科技学院;

黑龙江哈尔滨150030;

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正文语种 chi
中图分类实验用动物;
关键词
拟蜘蛛拖丝蛋白基因; 小鼠颗粒细胞; 整合; 鉴定;

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