pGL3-BMP2荧光素酶报告基因载体的构建及鉴定

钟良英; 丁红珂; 刘敏; 黄彬; 何小洪; 陈培松

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pGL3-BMP2荧光素酶报告基因载体的构建及鉴定

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目的扩增BMP2基因下游110kb处的预测有增强子功能的非编码序列,将其插入pGL3-promoter载体,构建该长片段的真核表达系统。方法在所设计的上下游引物的5’端加入BamHⅠ酶切位点,采用聚合酶链反应(PCR)的方法从短指畸形患者外周血提取的DNA中扩增BMP2基因下游区域预测有增强子功能的一段长约5kb的非编码序列。首先将扩增的目标片段与PGEM-T载体连接,连接产物转化DH5α感受态细菌,经蓝白斑筛选出的阳性克隆通过电泳、酶切鉴定后进行测序验证是否为插入的目标序列,测序正确后提取重组质粒。利用限制性内切酶BamHⅠ同时酶切插入目标序列的质粒和pGL3-promoter载体,将酶切完全的目标序列与线性pGL3-promoter空质粒载体在Solution I快速连接酶的作用下进行连接反应,构建目标序列的真核表达载体。结果经过酶切和测序证实含有4.8kb长的目标序列的分子克隆和真核表达载体构建成功。结论实验成功克隆了BMP2基因下游区域预测有增强子功能的一段长约5kb的非编码序列,并构建了pGL3-promoter-enhancer真核表达载体,为进一步验证该序列可能的调控功能奠定了基础。

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来源
《中国优生与遗传杂志》 |2013年第9期|15-17|共5页
作者
钟良英; 丁红珂; 刘敏; 黄彬; 何小洪; 陈培松;
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作者单位

中山大学附属第一医院检验医学部;

广东广州510080;

广东省妇幼保健院产前诊断与遗传病诊疗中心;

广东广州511445;

广东省妇幼保健院妇幼代谢与遗传病重点实验室;

广东广州511445;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类 R346;
关键词
BMP2基因; 非编码区域; 长片段分子克隆; pGL3-promoter载体;

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