利用单细胞RT-PCR体外克隆个体化乙型肝炎表面抗体重链

王晔恺; 周世权; 周吉航; 曾芳; 黄燕燕; 刘晓光

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目的建立一种利用单细胞RT-PCR技术克隆乙型肝炎表面抗体重链的方法,为人源化、个体化的乙肝治疗性抗体研制奠定基础。方法利用单细胞分选技术从乙肝疫苗接种志愿者外周血中分选得到单个抗体分泌细胞(antibody-secreting cells,ASC),用单细胞RT-PCR克隆其IgG重链全长到pEGFP-N1载体,转染COS-7细胞,上清液用乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)通过Western blot进行结合力验证。结果克隆得到1 500 bp左右的重链全长,重链表达产物经验证能与乙肝表面抗原特异结合。结论克隆得到表达产物能与HBsAg特异结合的重链基因,为我们后期制备抗体轻链、连接轻重链和抗体亲和力鉴定奠定基础。

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来源
《中国微生态学杂志》 |2011年第3期|208-211|共4页
作者
王晔恺; 周世权; 周吉航; 曾芳; 黄燕燕; 刘晓光;
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作者单位

舟山医院;

浙江舟山316004;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类免疫细胞生物学;
关键词
单细胞分选; 单细胞逆转录PCR; 乙肝表面抗原; 重链;

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