双表达骨形态发生蛋白2、9重组腺病毒载体的构建和表达

林春阳; 陈亮; 罗进勇; 邓忠良

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双表达骨形态发生蛋白2、9重组腺病毒载体的构建和表达

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目的构建双表达骨形态发生蛋白(Bone morphogenic protein,BMP)2、9腺病毒重组体并进行鉴定。方法自单一表达的BMP2或BMP9 AdEasy质粒上扩增BMP2和BMP9片段,先后亚克隆至穿梭质粒pASG2,获得双表达穿梭质粒pASG2-BMP2、9。酶切及PCR鉴定确认、测序正确后同源重组获得双表达BMP2、BMP9腺病毒质粒,转染至HEK-293细胞中包装和扩增得到高滴度双表达BMP2、BMP9腺病毒,体外感染C3H10细胞,RT-PCR鉴定并观察其早期诱导成骨情况。结果成功构建双表达BMP2、BMP9的腺病毒,滴度约为1010IU/mL,RT-PCR证实双表达腺病毒在C3H10细胞中表达,其感染的C3H10细胞早期碱性磷酸酶含量较单一表达的BMP2或BMP9腺病毒组增加。结论成功构建双表达BMP2、9的重组腺病毒载体,为进一步研究BMP2和BMP9的协同成骨作用和制备高效的组织工程人工骨提供了有利的工具。

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来源
《中国微生态学杂志》 |2011年第7期|593-596|共4页
作者
林春阳; 陈亮; 罗进勇; 邓忠良;
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作者单位

重庆医科大学附属第二医院骨科;

重庆400010;

重庆医科大学检验系分子医学实验室;

重庆400016;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类 R34;
关键词
双表达BMP2-BMP9载体; 重组腺病毒; 载体构建; 表达;

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