PCV3 Cap基因在昆虫杆状病毒中的表达与鉴定

姜宇航; 徐一鸣; 许汪; 杜寿文; 宋利娜; 陈竞; 郝鹏飞; 金宁一; 李昌

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试验旨在获得具有天然构象且反应原性良好的猪圆环病毒3型(porcine circoviurs 3,PCV3)Cap蛋白。以本实验室保存的PCV3Cap基因为模板,设计不同引物扩增Cap基因,将其亚克隆至pEASY-Blunt载体上,验证正确后将目的基因分别克隆至杆状病毒表达载体pFastBacTM上(含有双启动子),获得含有2个PCV3Cap基因的重组质粒pFBD-P2C。将该重组质粒转化大肠杆菌DH10-BacTM感受态细胞当中,进行蓝白斑筛选,获得重组杆状质粒Bacmid P2C,利用脂质体转染至SF9细胞中进行病毒拯救,转染后72h,收取上清病毒液,盲传3代,收取SF9细胞应用间接免疫荧光法(IFA)及Western blot检测目的蛋白是否表达。结果显示,重组质粒pFBD-P2C酶切验证正确,重组杆粒Bacmid P2C构建成功,杆状病毒中能够表达PCV3Cap蛋白且能与His-tag抗体发生特异性反应,IFA鉴定出现特异性绿色荧光,表明成功表达了PCV3Cap蛋白且具有反应原性,为深入开展PCV3抗体制备、新型疫苗研发奠定了基础。

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来源
《中国兽医学报》 |2019年第11期|2112-2117|共7页
作者
姜宇航; 徐一鸣; 许汪; 杜寿文; 宋利娜; 陈竞; 郝鹏飞; 金宁一; 李昌;
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作者单位

吉林农业大学动物科技学院;

吉林长春130118;

吉林省畜牧总站;

吉林长春130062;

军事医学研究院军事兽医研究所省部共建吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室;

吉林长春130122;

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正文语种 chi
中图分类家畜病毒学;
关键词
猪圆环病毒3型; 重组杆状病毒; Cap蛋白; 表达;

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