人乳头瘤病毒主要衣壳蛋白L1在大肠埃希菌中的表达

杨旭; 夏烨; 李亚东; 金晓媚; 龙琼; 孙文佳; 黄惟巍; 刘存宝; 姚宇峰; 马雁冰

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人乳头瘤病毒主要衣壳蛋白L1在大肠埃希菌中的表达

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目的探讨在大肠埃希菌中不同因素对高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)L1蛋白表达的影响,为研发针对多型别HPV的低价、广谱疫苗奠定基础。方法通过采用非融合、不同融合蛋白形式,不同基因型HPV L1序列,以及同一基因型但不同序列特征等构建HPV L1非融合及融合表达重组质粒及HPV L1谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione-S-transferase,GST)融合表达质粒,转化不同宿主菌(大肠埃希菌DH5α、BL21),在不同的温度下(37、20℃)进行IPTG诱导表达,12%SDS-PAGE分析融合蛋白的表达及其可溶性,Western blot鉴定表达的融合蛋白。结果 HPV 16 L1蛋白在GST融合蛋白形式下获得了高效表达,而非融合表达或硫氧还蛋白融合表达未见明显目的条带;不同的宿主菌未对GST融合蛋白表达水平产生明显影响;在37℃培养条件下,表达的GST融合蛋白以包涵体形式存在,而在20℃培养条件下,部分表达的蛋白以可溶性形式存在;HPV 16 L1基因不同序列获得了类似的表达水平;经酵母密码子优化的HPV 18 L1与HPV 58 L1基因均能以GST融合表达形式获得与HPV 16 L1相似的高效表达。结论在大肠埃希菌中以GST融合形式可获得多基因型别HPV L1蛋白的高效可溶性表达,为病毒样颗粒体外折叠制备奠定了基础,也为其他外源基因在大肠埃希菌中的高效表达提供了参考。

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来源
《中国生物制品学杂志》 |2015年第3期|245-250|共7页
作者
杨旭; 夏烨; 李亚东; 金晓媚; 龙琼; 孙文佳; 黄惟巍; 刘存宝; 姚宇峰; 马雁冰;
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作者单位

中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所分子免疫研究室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发国家地方联合工程研究中心;

云南昆明650118;

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正文语种 chi
中图分类其他病毒;基因的表达;
关键词
乳头瘤病毒; 衣壳蛋白; 大肠埃希菌; 表达;

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