Floral-dip转化法将PEPC基因ihpRNA干扰表达载体导入甘蓝型油菜

付绍红; 张汝全; 牛应泽

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根据磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(PEPC)基因控制油菜籽中蛋白质与脂肪酸合成的原理,构建了PEPC基因片段ihpRNA干扰表达载体,该载体包含了一个PEPC基因片段正反向序列的回文结构.表达RNA干扰的载体结构(ihpRNA),在大肠杆菌体内进行克隆的过程中易被大肠杆菌自身携带的某种酶剪切,剪切位点不确定,可能是一种随机性的剪切.通过反复实验,最终获得了一个与我们设计一致的PEPC基因片段正反向序列结构,RNA干扰表达载体构建获得成功.利用花序浸渍法(floral-dip)转基因将构建的PEPC基因ihpRNA干扰表达载体转移到甘蓝型油菜中,并通过抗性筛选、PCR特异扩增、PCR-Southern杂交和克隆测序,对获得的转基因植株进行了鉴定,转化率达到了0.69%,说明floral-dip方法有效地实现了ihpRNA干扰表达载体的遗传转化.

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来源
《中国生物化学与分子生物学报》 |2009年第8期|764-769|共6页
作者
付绍红; 张汝全; 牛应泽;
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作者单位

四川农业大学油菜研究中心;

雅安625014;

成都市农林科学院作物所;

国家油菜改良中心四川成都分中心;

温江611130;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类油菜籽（芸薹）;基因工程的应用;
关键词
花序浸渍法(floral-dip); 磷酸烯醇丙酮酸羧化酶基因; ihpRNA表达载体; 甘蓝型油菜; 遗传转化;

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