人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库的构建及筛选

毕司英; 毛晓燕; 陈继军; 秦海艳

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人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库的构建及筛选

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目的构建人源抗狂犬病病毒单链抗体(Single-chain fragment variable,scFv)噬菌体抗体库,并进行筛选。方法以接种过狂犬病疫苗的21份高效价的健康人外周血为原料,提取淋巴细胞总RNA,PCR扩增VH、Vκ、Vλ基因,重叠延伸PCR扩增获得scFv基因,克隆入噬菌粒pS100,电转化E.coli TG1,建立scFv初级抗体库,并进行基因序列分析及鉴定。以灭活的狂犬病病毒为抗原,进行3轮scFv噬菌体抗体库的富集筛选,随机挑取单克隆,制备噬菌体抗体颗粒,并进行ELISA分析,阳性克隆进行序列分析,采用快速荧光灶抑制试验(Rapid fluorescent facus inhibition test,RFFIT)检测噬菌体抗体颗粒的中和活性。结果获得了库容为1.7×108的人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,该抗体库具有较好的序列正确率和多样性,经3轮筛选后,ELISA分析显示,共获得24个序列各不相同的针对狂犬病病毒的阳性克隆,对其中7个克隆的噬菌体抗体颗粒进行RFFIT检测,均具有中和活性。结论已成功构建了人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,并建立了筛选方法。

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来源
《中国生物制品学杂志》 |2012年第12期|1578-1582|共5页
作者
毕司英; 毛晓燕; 陈继军; 秦海艳;
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作者单位

兰州生物制品研究所有限责任公司第五研究室;

兰州730046;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;
关键词
狂犬病病毒; 单链抗体; 噬菌体展示技术; 抗体库;

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