应用RED同源重组技术构建表面展示链球菌GapC1的大肠埃希菌

杨汐静; 张建新; 陈晓亭; 汤炜; 于思淼; 刘伟; 姚笛; 吴志军; 于立权; 朱战波; 崔玉东

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目的应用RED同源重组技术构建表面展示链球菌Gap C1-150 aa(Gap C1)的大肠埃希菌,为进一步构建大肠埃希菌表面展示重组菌株奠定基础。方法根据Gen Bank中登录的gap C基因序列(GI:30348860)设计引物,以质粒p KD3、p QE30/lpp-omp A-gap C为模板进行PCR扩增、融合,获得融合片段,转化入含p KD46质粒的大肠埃希菌HB101中,利用p KD46编码的RED系统将融合片段重组入基因组中,经氨苄西林(Amp)和氯霉素(Cm)抗性筛选,获得去除p KD46质粒的重组菌(HB101LOG)。对重组菌株进行PCR、Western blot、流式细胞术、荧光显微镜及生物学特性检测。结果 PCR结果显示,重组菌株构建正确;重组大肠埃希菌HB101LOG在菌体表面表达了外源蛋白Gap C1-150 aa;激光共聚焦显微镜观察到HB101LOG可见明显的绿色荧光,HB101未见绿色荧光;重组菌株HB101LOG和HB101的生长曲线符合大肠埃希菌的生长规律。结论应用RED系统成功构建了能展示链球菌Gap C1-150 aa的大肠埃希菌重组菌株。

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来源
《中国生物制品学杂志》 |2015年第3期|239-244|共6页
作者
杨汐静; 张建新; 陈晓亭; 汤炜; 于思淼; 刘伟; 姚笛; 吴志军; 于立权; 朱战波; 崔玉东;
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作者单位

黑龙江八一农垦大学动物科技学院;

黑龙江大庆163319;

黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院;

黑龙江大庆163319;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因的重组;
关键词
链球菌; GapC蛋白; 大肠埃希菌; RED同源重组;

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