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枳术丸汤剂含药血清对大鼠结肠Cajal间质细胞增殖及PLC-γ信号通路的影响

         
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目的探讨枳术丸治疗慢传输型便秘的可能作用机制。方法20只SD雄性大鼠随机分为枳术丸汤剂组、空白组,每组10只。枳术丸汤剂组大鼠每日给予浓度为2 g/ml枳术丸汤剂5.8 g灌胃,连续7天,空白组正常饲养。末次给药后1 h腹主动脉采血离心制备含药血清。采用CCK8法观察磷脂酶C-γ(PLC-γ)特异性抑制剂U73122对大鼠结肠原代Cajal间质细胞的细胞抑制率来筛选药物浓度,观察5%、10%、15%、20%浓度的枳术丸汤剂含药血清对Cajal间质细胞的细胞增殖率筛选药物浓度,并分别培养12、24、48 h来筛选用药时间。取二或三代Cajal间质细胞接种至96孔板中,每孔1×10^(4)个细胞,每组重复3孔。实验分为正常组、模型组(正常细胞+筛选浓度的U73122)、空白血清组(模型组+10%空白血清)、枳术丸汤剂血清组(模型组+筛选浓度枳术丸含药血清)。干预时间为实验筛选出的时间。免疫组化法检测磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)、磷脂酶C-γ2(PLC-γ2)阳性表达,Western blot法检测PLC-γ1、PLC-γ2蛋白表达,RT-PCR法检测PLC-γ1、PLC-γ2基因表达。结果筛选出U73122最佳实验药物浓度为30μmol/L,枳术丸汤剂组最佳用药浓度为5%,实验最佳干预时间为24 h。与正常组比较,模型组PLC-γ1、PLC-γ2平均光密度值、蛋白及基因表达均降低(P<0.01);与模型组比较,枳术丸汤剂血清组、空白血清组PLC-γ1、PLC-γ2平均光密度值、蛋白及基因表达均升高(P<0.05或P<0.01);与空白血清组比较,枳术丸汤剂血清组PLC-γ1、PLC-γ2阳性表达、蛋白及基因表达明显增多(P<0.01)。结论枳术丸汤剂可能通过激活Cajal间质细胞PLC-γ信号通路,调控细胞增殖,从而促进胃肠运动。

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