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参附益心颗粒对AngⅡ诱导的H9c2心肌细胞损伤及PGC-1α信号通路相关因子的影响

         
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目的 探讨参附益心颗粒治疗慢性心力衰竭可能的作用机制。方法 通过超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱检测参附益心颗粒的离子成分。将H9c2心肌细胞分为正常1组、模型1组、参附益心颗粒低剂量组、参附益心颗粒高剂量组、氯沙坦组、辅酶Q10组。除正常1组外,其余各组采用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导H9c2心肌细胞损伤模型,同时参附益心颗粒低、高剂量组分别用含参附益心颗粒0.25、0.5 mg/ml的培养基培养,氯沙坦组用含氯沙坦片1×10^(-4)mol/L的培养基培养,辅酶Q10组用含有辅酶Q10片1×10^(-4)mol/L的培养基培养,各组均培养24 h。再将H9c2细胞分为正常2组、模型2组、转染模型组、转染参附益心颗粒组、转染对照组。除正常2组、转染对照组外,其余各组采用AngⅡ诱导H9c2心肌细胞损伤模型,同时转染模型组、转染参附益心颗粒组、转染对照组给予Lipofectmine 2000转染试剂进行转染,转染参附益心颗粒组给予转染前实验结果更好的参附益心颗粒剂量继续培养。采用CCK-8法检测各组细胞活性,Mito-Tracker荧光探针观察H9c2细胞中线粒体含量,检测H9c2细胞中乳酸脱氢酶(LDH)含量及心肌细胞相关基因[过氧化物酶体增殖物激活受体α (PPARα)、过氧化物酶体增殖物激活受体β/δ (PPARβ/δ)、过氧化物酶体增殖物活化受体γ辅助激活因子1α (PGC-1α)、核呼吸因子1 (NRF-1)、核呼吸因子2 (NRF-2)、雌激素相关受体(ERR)] mRNA表达。结果 参附益心颗粒药物定性的正离子物质成分共有387个,含量最多的为Stachydrine (水苏碱)、5-Hydroxymethylfurfural (5-羟甲基糠醛)、Retronecine (倒千里光裂碱);定性的负离子物质成分共有308个,含量最多的为Danshensu(丹参素)、Malic acid(苹果酸)、4-hydroxybenzoic acid (4-羟基苯甲酸)。转染参附益心颗粒组给药剂量为0.5 mg/ml。基因沉默前,与正常1组比较,模型1组细胞活性及各相关基因mRNA表达降低、LDH含量升高(P0.05),线粒体含量改善不明显。与参附益心颗粒高剂量组比较,转染参附益心颗粒组心肌细胞活性及PPARα、PPARβ/δ、PGC-1α、NRF-1、NRF-2、ERR mRNA表达均降低,LDH含量升高(P<0.05)。结论 参附益心颗粒可能通过调节PGC-1α信号通路相关因子,改善心肌细胞损伤,从而发挥治疗慢性心力衰竭的作用,其有效物质成分可能为丹参酮、水苏碱、5-羟甲基糠醛、苹果酸等。

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