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诱导多能干细胞培养中饲养层制备的条件优化

         

摘要

目的建立分离培养小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast MEF)的体系,探讨诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPSC)培养所需饲养层的最佳制备方法,制备高质量的IPSC饲养层细胞。方法采用胰蛋白酶消化法,将昆明小鼠胚胎制成细胞悬液接种培养。用不同浓度的丝裂霉素C处理MEF细胞制备饲养层,观察处理后的细胞活力及有无再增殖现象,在制备的饲养层细胞上接种IPS细胞,观察各组IPS细胞生长状态。结果采用0.0625%胰蛋白酶消化孕12.5-14.5d雌鼠胚胎组织获得高活力的MEF细胞,用15μg/ml的丝裂霉素C处理后MEF细胞无明显增值,细胞活力在90%以上,其IPS细胞生长状况最好,效果最佳。结论该方法可获得高活力的MEF细胞。15μg/ml的丝裂霉素C处理1.5h后的MEF细胞制成的饲养层最适于IPS细胞生长。

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