人溶菌酶-人碱性成纤维细胞生长因子融合基因在毕赤酵母中的表达

韦敬土; 刘晓彤; 邬敏辰; 唐存多

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人溶菌酶-人碱性成纤维细胞生长因子融合基因在毕赤酵母中的表达

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目的在毕赤酵母中表达人溶菌酶(Human lysozyme,hLY)-人碱性成纤维细胞生长因子(Human basic fibroblast growth factor,hbFGF)融合基因,并分析融合蛋白的hLY活性。方法从人全血中提取总RNA,以其为模板,采用RT-PCR法扩增编码hLY成熟肽的cDNA。利用重叠PCR技术将hly基因与hbfgf基因融合,中间引入凝血酶识别位点序列;将融合基因克隆至载体pPIC9K中,构建重组表达质粒pPIC9K-hly-thr-hbfgf,电转化毕赤酵母GS115,通过G418抗性筛选高拷贝重组子GS/hly-thr-hbfgf,甲醇诱导表达融合蛋白,Bradford法测定重组子发酵液上清中总蛋白含量,改良舒加法检测融合蛋白hHLY-THR-hbFGF的hLY活性。结果获得的融合基因序列与理论序列一致;经PCR鉴定,融合基因hly-thr-hbfgf已整合入GS115基因组内;表达的融合蛋白相对分子质量约为33 000,发酵液上清中总蛋白含量为196.20 mg/L,融合蛋白的hLY活性为40 U/ml。结论已成功地在毕赤酵母GS115中表达了具有hLY活性的hHLY-THR-hbFGF融合蛋白。

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来源
《中国生物制品学杂志》 |2012年第6期|689-692|共4页
作者
韦敬土; 刘晓彤; 邬敏辰; 唐存多;
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作者单位

江南大学医药学院;

江苏无锡214122;

江南大学工业生物技术教育部重点实验室;

江苏无锡214122;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因的表达;
关键词
溶菌酶; 碱性成纤维细胞生长因子; 融合基因; 毕赤酵母; 表达;

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