牛产气荚膜梭菌α-ε毒素基因的融合表达及其纯化

尹辉; 赵达; 陈为宏; 高佳滨; 乔波; 陈楠楠; 胡旭; 梁鸿儒; 姜东君; 王鹤; 朱战波

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目的融合表达产气荚膜梭菌α毒素基因和ε毒素基因的融合基因α-ε,并进行纯化。方法利用PCR技术,从A型产气荚膜梭菌C57-8株基因组DNA中扩增出α毒素基因的部分基因片段,插入到质粒p ET28a-ε上,构建含α-ε融合毒素基因的表达质粒p ET28a-α-ε,转化至E.coli BL21(DE3)plys S感受态细胞中,IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒纯化后,进行Western blot鉴定。结果重组质粒p ET28a-α-ε经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,与预期的基因序列重合率为99%。表达的重组蛋白相对分子质量约78 000,主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的22.7%,纯度为91.2%,可与小鼠产气荚膜梭菌多抗血清特异性结合,具有良好的反应原性。结论成功构建了重组质粒p ET28a-α-ε,并在E.coli BL21(DE3)plys S中表达了重组α-ε融合蛋白,该蛋白具有良好的反应原性,可作为预防牛肠毒血症基因工程亚单位疫苗的候选抗原。

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来源
《中国生物制品学杂志》 |2015年第3期|261-265|共5页
作者
尹辉; 赵达; 陈为宏; 高佳滨; 乔波; 陈楠楠; 胡旭; 梁鸿儒; 姜东君; 王鹤; 朱战波;
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作者单位

黑龙江八一农垦大学动物科技学院;

黑龙江大庆163319;

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正文语种 chi
中图分类基因的表达;
关键词
产气荚膜梭菌; α毒素基因; ε毒素基因; 融合表达; 纯化;

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