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水痘-带状疱疹病毒ORF7蛋白原核表达及单抗制备

         
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水痘-带状疱疹病毒（Varicella-zoster virus,VZV）减毒活疫苗株（V-Oka）为混合毒株，仍具备感染和潜伏神经系统的能力，VZV第7个开放阅读框（Open reading frame7,ORF7）嗜神经因子敲除的毒株有望成为更安全的VZV减毒活疫苗株，本文重组表达VZV ORF7蛋白，制备其单克隆抗体（Monoclonal antibody,McAb），建立ORF7荧光抗体检测方法，为新一代ORF7敲除的VZV减毒疫苗的检测提供方法学基础。本研究以V-Oka株orf7为扩增模板，构建重组表达质粒pET-28a-ORF7，转化至E.coli BL21（DE3）,IPTG诱导表达后，镍离子柱亲合层析纯化表达蛋白，WB鉴定重组蛋白的活性，免疫BALB/c小鼠，应用杂交瘤技术制备抗VZV ORF7单克隆抗体，对单抗进行鉴定，选取一株稳定、特异、高效的单抗进行纯化并标记异硫氰酸荧光素（Fluorescein Isothiocyanate,FITC）。结果显示，重组ORF7蛋白以包涵体形式表达，分子量约29 kD，亲和纯化后纯度约为92.0%，盐酸胍复性蛋白可与VZV全病毒免疫小鼠血清特异性反应。采用杂交瘤细胞融合技术，筛选获得6株杂交瘤细胞，细胞上清单抗效价均达1∶51 200,6株单抗均属于IgG1亚类，抗原结合位点相同或相近，WB鉴定与VZV全病毒、原核及真核ORF7表达蛋白具有特异性反应。所制备FITC-4H7能够有效检出培养过程中ORF7蛋白，初步建立了病毒ORF7荧光抗体检测方法，为新型orf7基因敲除VZV减毒活疫苗毒株传代评价以及相关检测方法的建立奠定了基础。

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