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小檗碱对LPS诱导神经元损伤的作用机制研究

         
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为探究小檗碱（berberine, Ber）对LPS诱导的神经元损伤及腺苷一磷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated protein kinase, AMPK）-mTOR-p70核糖体蛋白S6激酶（ribosomaiprotein S6 kinase, S6K）信号通路的影响，MTT法筛选最佳的Ber处理HT22神经元浓度。将HT22细胞分为NC组、LPS组、Ber+LPS组和AMPK抑制剂Compound C（Com.C）+Ber+LPS组。FACS检测HT22细胞凋亡率；qRT-PCR法检测HT22细胞IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA相对表达量；DCFH-DA荧光探针检测HT22细胞中活性氧类（reactive oxygen species, ROS）含量；TBA法、比色法和WST-1法分别检测HT22细胞中丙二醛（malondialdehyde, MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase, GSH-Px）和总超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）的含量；Western blotting检测HT22细胞中B淋巴细胞瘤2基因（B-cell lymphoma 2, Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein, BAX）、脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor, BDNF）、原肌球蛋白受体激酶B（tropomyosin receptor kinase B, TrkB）、神经生长因子（nerve growth factor, NGF）、磷酸化AMPK（p-AMPK）、磷酸化mTOR（p-mTOR）和磷酸化p70S6K（p-p70S6K）蛋白的表达水平。结果显示，与0μmol/L Ber比较，5μmol/L和10μmol/L Ber处理对HT22细胞增殖活力的影响差异无统计学意义（均P＞0.05）, 15μmol/L和20μmol/L Ber处理可显著降低HT22细胞的增殖活力（均P＜0.05）,因此选择10μmol/L Ber用于后续研究。与NC组相比，LPS处理可增加HT22细胞的凋亡率（P＜0.05）,上调细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA相对表达水平（均P＜0.05）,上调ROS和MDA的含量以及BAX、p-mTOR和p-p70S6K蛋白的表达水平（均P＜0.05）,下调细胞中GSH-Px和SOD含量以及Bcl-2、BDNF、TrkB、NGF和p-AMPK蛋白表达水平（均P＜0.05）。Ber干预显著减轻了LPS诱导的HT22细胞损伤（均P＜0.05）, Com.C预处理部分逆转了Ber处理对LPS诱导的HT22细胞的保护作用（均P＜0.05）。由此，Ber可能通过调控HT22细胞中AMPK-mTOR-p70S6K信号通路缓解LPS诱导的神经元损伤。

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