重组酶聚合酶扩增技术检测结核分枝杆菌

单纯; 吴培; 苏瑞霞; 高超; 喻永新; 张洪英; 许银芳

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重组酶聚合酶扩增技术检测结核分枝杆菌

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目的利用重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)技术检测结核分支杆菌。方法采用Axxin T8-ISO扩增仪(TwistDX公司),反应温度设置为39℃,反应时间20min。检测分为实验组、阳性对照组和空白对照组。实验组模板DNA从痰液中提取。阳性对照模板DNA为H37Rv标准菌株样本DNA及卡介苗提取的DNA。空白对照为蒸馏水。结果 RPA技术可在20min内明显区分103～106 copies/mL的阳性质粒与阴性对照。对分离培养的结核杆菌(H37Rv)DNA及卡介苗提取的DNA,阳性克隆质粒进行等温扩增,结果结核杆菌分离株DNA、卡介苗DNA、阳性克隆质粒均有阳性扩增反应,而非结核分枝杆菌分离株和阴性对照无阳性扩增反应。灵敏度为100%,特异性为82%。结论 RPA技术利用了重组酶、单链结合蛋白、DNA聚合酶代替了传统PCR变性、退火、延伸的热循环过程,在常温25℃～42℃、15～30min内即可实现痕量核酸的快速扩增,可应用于快速检测人结核分枝杆菌,是一种全新的检测方法。

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来源
《中国微生态学杂志》 |2019年第2期|164-166|共4页
作者
单纯; 吴培; 苏瑞霞; 高超; 喻永新; 张洪英; 许银芳;
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作者单位

东南大学附属中大医院感染科;

江苏南京210009;

上海海洋大学;

上海200090;

南京市疾病控制预防中心;

江苏南京210003;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类微生物学检验;
关键词
结核分支杆菌; 重组酶聚合酶扩增; 常温检测;

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