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典型升浮中药和沉降中药潜在作用靶点网络药理学及大鼠体内验证研究

         
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目的探究典型升浮中药和沉降中药的潜在作用靶点。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台检索并筛选升浮中药(麻黄、柴胡、升麻、葛根、桔梗、薄荷)和沉降中药(葶苈子、旋覆花、刀豆、川牛膝、茯苓、苦杏仁、丁香)的靶点;以病位在表(风寒表证、风水水肿)、病位在里(痰饮停聚、肺水)、病势下陷(胃缓、心衰)、病势上逆(呕吐、肝阳上亢)在GeneCards数据库检索病症靶点。取升浮中药与病位在表、病势下陷病症的共有靶点,推测其可能为升浮中药的潜在作用靶点;取沉降中药与病位在里、病势上逆病症的共有靶点,推测其可能为沉降中药的潜在作用靶点。再进行动物实验验证:将140只雄性SD大鼠分为正常对照组、麻黄组(4.2 g/kg)、柴胡组(7 g/kg)、升麻组(7 g/kg)、葛根组(10.5 g/kg)、桔梗组(7 g/kg)、薄荷组(4.2 g/kg)、葶苈子组(7 g/kg)、旋覆花组(6.3 g/kg)、刀豆组(6.3 g/kg)、川牛膝组(7 g/kg)、茯苓组(10.5 g/kg)、苦杏仁组(7 g/kg)和丁香组(2.1 g/kg),每组10只,以1ml/100g灌胃体积连续灌胃相应药物14天。根据网络药理学研究结果,采用实时荧光定量PCR法检测大鼠肺组织中胰岛素生长因子2(IGF-2)、己糖激酶2(HK-2)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、毒蕈碱乙酰胆碱受体M3(CHRM3)、毒蕈碱乙酰胆碱受体M1(CHRM1)和糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)的mRNA水平;采用Western Blot法和免疫组化法检测CHRM3、CHRM1和PPAR-γ蛋白水平。结果网络药理学结果显示,升浮中药潜在作用靶点为IGF-2和HK-2,沉降中药潜在作用靶点有PPAR-γ、CHRM3、CHRM1和GSK-3β。mRNA及蛋白检测结果显示,与正常对照组比较,麻黄组、柴胡组、升麻组、葛根组、桔梗组、丁香组和刀豆组CHRM3水平均显著降低,苦杏仁组CHRM3水平显著升高(P<0.05或P<0.01);葛根组和桔梗组CHRM1水平显著降低,薄荷组、葶苈子组、旋覆花组、川牛膝组、茯苓组、丁香组、苦杏仁组和刀豆组CHRM1水平显著升高(P<0.05或P<0.01);麻黄组、升麻组、葛根组和桔梗组PPAR-γ水平显著降低,旋覆花组、川牛膝组、茯苓组、苦杏仁组PPAR-γ水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论典型升浮中药和沉降中药潜在作用靶点主要为CHRM3、CHRM1和PPAR-γ。

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