静注人免疫球蛋白抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用测定方法的建立

朱丽媛; 刘卿; 马莉; 李长清

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静注人免疫球蛋白抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用测定方法的建立

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目的利用转录报告基因细胞,建立静注人免疫球蛋白(pH4)(human Immunoglobulin(pH4)for Intravenous Injection,IVIG)抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)生物学活性测定方法。方法以Jurkat-NFAT-Luc-CD16细胞作为效应细胞,PLC/PRF/5细胞作为靶细胞,将效应细胞、靶细胞和IVIG孵育后,通过检测IVIG Fc段结合效应细胞后活化T细胞核因子释放的荧光素酶,建立IVIG ADCC生物学活性检测方法,同时对试验条件进行优化,以及对该方法进行方法学验证。结果IVIG在该方法中存在量效关系,符合四参数方程。经过试验条件优化,最终确定将PLC/PRF/5细胞作为靶细胞,抗体起始稀释浓度为20 mg/mL,梯度稀释倍数为1∶2,效靶比为1∶3,效应细胞、靶细胞和IVIG共同孵育时间为24 h。三次独立检测的日内和日间起始工作浓度荧光素酶相对光单位(relative light unit,RLU)及半最大效应浓度(concentration for 50%of maximal effect,EC50)的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均<11%,2个不同稀释组回收率样本相对效价分别(23.50±1.69)%,(49.30±2.97)%,对应的回收率分别为(93.50±6.30)%,(96.24±5.43)%,RSD均<11%。结论本研究利用转录报告基因细胞成功建立IVIG ADCC生物学活性检测方法,该方法具有专属性强、重复性好、准确性高等优点,可作为IVIG ADCC生物学活性检测方法。

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来源
《中国输血杂志》 |2023年第2期|121-125|共5页
作者
朱丽媛; 刘卿; 马莉; 李长清;
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作者单位

中国医学科学院北京协和医学院输血研究所;

四川成都610052;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类免疫分子生物学（免疫化学）;免疫物质测定;
关键词
静注人免疫球蛋白; Fc段; 抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用; 生物学活性;

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