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巴贝西虫实时荧光PCR检测方法初步建立及牡丹江市无偿献血者中巴贝西虫流行情况调查

         
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目的建立一种筛查多种可感染人巴贝西虫（包括Babesia.microti,B.divergens,B.venatorum,Babesia.sp EU1,Babesia_sp._XXB/Hangzhou等）的实时荧光PCR检测方法;用实时荧光PCR和间接免疫荧光检测（IFA）2种方法分别对牡丹江市无偿献血者血样进行核酸和血清学检测,评估其对当地输血安全的风险。方法从Gen Bank下载我国可感染人巴贝西虫的18S r RNA基因序列,并根据序列共同部分设计引物,用引物验标准质粒并优化实验条件,建立实时荧光PCR检测方法。将1 971份无偿献血者的血液标本离心,使其分离成红细胞和血浆2个部分：1971份红细胞标本混样（10份/pool）,用已建立的实时荧光PCR进行核酸检测,阳性混样池再拆分检测;其中1 000份血浆标本用IFA法进行B.microti Ig G检测。结果经琼脂糖凝胶电泳和一代测序验证,标准质粒构建成功且实验条件已经优化,成功建立了实时荧光PCR检测方法,重复性良好,最低检测下限为9.69×102copies/m L;1 971份红细胞样本巴贝西虫核酸检测结果均为阴性;1 000份血浆样本B.microti Ig G血清学检测结果显示共13例阳性（阳性率1.3%）,其中8例（0.8%）滴度为1∶64,5例（0.5%）滴度为1∶128。结论本研究成功建立了一种筛查多种感染人巴贝西虫的实时荧光PCR核酸检测方法;标本检测结果显示牡丹江地区有既往B.microti感染,提示巴贝西虫已经对该地区血液安全造成一定威胁,但风险大小有待进一步评估。

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