人骨形成蛋白3在昆虫杆状病毒表达系统中的表达、纯化及其诱骨活性检测

朱帮福; 卢兹凡; 陈苏民; 蒲勤; 路凡; 陈南春

首页> 中文期刊> 《中国生物化学与分子生物学报》 >人骨形成蛋白3在昆虫杆状病毒表达系统中的表达、纯化及其诱骨活性检测

人骨形成蛋白3在昆虫杆状病毒表达系统中的表达、纯化及其诱骨活性检测

开具论文收录证明 >>

期刊封面封底目录下载 >>

文献代查 >>

页面导航

摘要
著录项
相似文献
相关主题

摘要

为了在昆虫杆状病毒系统中表达人骨形成蛋白 3(humanbonemorphogeneticproteoin3,hBMP3) ,检测表达产物的诱骨活性 .将hBMP3全长cDNA 1416bp克隆入转移载体K8中 ,再与病毒DNA经脂质体包裹后转染昆虫细胞Sf9.重组病毒经蓝白筛选后 ,用PCR方法扩增目的基因片段进行初步鉴定 .收集重组病毒的转染上清 ,肝素亲和层析纯化目的蛋白 .SDS PAGE和Western印迹进一步鉴定此蛋白 .体外培养MC3T3 E1细胞 ,经目的蛋白刺激后 ,检测细胞内碱性磷酸酶 (ALP)活性 .并将目的蛋白进行小鼠体内肌肉包埋实验 ,检测其异位诱骨活性 .结果显示 ,肝素亲和层析可以收集 1个高的洗脱峰 .SDS PAGE显示 ,非还原型样本为 32kD的二聚体蛋白带和少量 16kD单体蛋白带 ;还原型样本仅有相应大小的单体蛋白带 ,纯度达 80 % .Western印迹在相应位置呈阳性染色 .此蛋白刺激小鼠成纤维细胞 4 8h后 ,胞内ALP的活性增高 ,经rhBMP3作用后的细胞MTT染色减弱 .在小鼠股部肌肉内包埋蛋白样品 2～ 3周 ,组织学检测有成骨组织生成 .说明hBMP3在此套系统中获得了表达 .表达产物在体外可以刺激成骨细胞的分化 ,却抑制细胞的增殖 .

著录项

来源
《中国生物化学与分子生物学报》 |2002年第1期|70-74|共5页
作者
朱帮福; 卢兹凡; 陈苏民; 蒲勤; 路凡; 陈南春;
展开▼
作者单位

第四军医大学生物化学与分子生物学教研室;

展开▼
原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类医学遗传工程;骨及骨骼生理学;
关键词
杆状病毒; 人骨形成蛋白3; 表达; 纯化; 诱骨活性; 检测;

相似文献

中文文献
外文文献
专利

1. 重组人骨形成蛋白—3成熟肽的表达,纯化及诱骨活性的研究 [J] . 朱帮福 ,陈苏民 . 生物工程学报 . 1999,第003期
2. 昆虫杆状病毒表达系统中人骨形成蛋白3的表达及鉴定 [J] . 卢兹凡 ,陈苏民 ,陈南春 . 第四军医大学学报 . 2000,第002期
3. 人骨形成蛋白2,3成熟肽削短/突变体的构建与表达及其诱骨活性 [J] . 张斌 ,蒲勤 ,李毅 . 第四军医大学学报 . 2001,第006期
4. 重组人PLCζ蛋白在昆虫细胞/杆状病毒表达系统内的表达、纯化及活性测定 [J] . Xin Chen ,Yueyue Hu ,Hongyi Xu . 生物工程学报 . 2019,第006期
5. 蛋白激酶D1催化结构域在昆虫细胞/杆状病毒表达系统内的表达、纯化和活性测定 [J] . 李志红 ,Qiming Jane Wang . 生物工程学报 . 2014,第008期
6. 人骨形成蛋白3在昆虫杆状病毒表达系统中的表达纯化及活性研究 [C] . 卢兹凡 . 第八次全国生物化学与分子生物学学术会议 . 1997
7. 人骨形成蛋白-4和人骨形成蛋白-7在毕赤酵母中的共表达及其纯化 [A] . 陈雅娟 . 2004

人骨形成蛋白3在昆虫杆状病毒表达系统中的表达、纯化及其诱骨活性检测

摘要

著录项

相似文献

相关主题

期刊订阅