野生型ADAR1蛋白与其R916W突变体在哺乳动物细胞中相互作用的研究

刘扬; 柳青; 赵谨; 吕丹; 华芮; 罗阳; 张学

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目的:应用酵母双杂交和哺乳动物双杂交系统研究野生型双链RNA腺苷酸脱氨基酶ADAR1蛋白(ADAR1WT)与其突变体R916W(ADAR1R916W)之间的相互作用,从而探讨ADAR1基因错义突变在遗传性对称性色素异常症中的分子致病机制。方法:通过RT-PCR方法从患者外周血白细胞中获得含ADAR1基因R916W突变的全长cDNA,将野生型和突变cDNA分别克隆到相关质粒载体上,利用MatchmakerTMGAL4酵母双杂交系统3和CheckMateTM哺乳动物双杂交系统检测蛋白单体间的相互作用。结果:在酵母细胞中未检测到野生型-野生型ADAR1蛋白及野生型-突变体ADAR1蛋白间的相互作用;与对照细胞相比,pBIND-ADAR1WT和pACT-ADAR1WT共转染的HeLa细胞中荧光素相对活性显著升高(P<0.05);与共转染pBIND-ADAR1WT和pACT-ADAR1WT的HeLa细胞比较,pBIND-ADAR1R916W和pACT-ADAR1WT共转染的细胞中荧光素相对活性明显降低(P<0.05),为前者的66%。结论:在哺乳动物细胞中ADAR1WT自身相互作用,ADAR1WT和ADAR1R916W突变体蛋白相互作用依然存在但作用明显减弱。

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来源
《山东大学学报：医学版》 |2007年第5期|450-454|共5页
作者
刘扬; 柳青; 赵谨; 吕丹; 华芮; 罗阳; 张学;
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作者单位

中国医科大学基础医学院医学基因组学教研室;

中国医学科学院基础医学研究所医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类医学遗传学;
关键词
ADAR1蛋白; R916W突变; 酵母双杂交系统; 哺乳动物双杂交系统;

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