人血管内皮生长因子受体Flt-1胞外配体结合域的筛选及其结构分析

马骊; 张智清; 王小宁; 陈爱君; 姚立红; 姜忠良

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血管内皮生长因子受体 Flt- 1胞外区具有 7个免疫球蛋白样的袢 (Ig- like loop) ,氨基端 3个loop负责与其配体 VEGF的结合 .为了寻求能与配体结合的更小的 Flt- 1片段 ,在对 Flt- 1胞外前3个 loop氨基酸组成和晶体结构分析的基础上 ,应用酵母双杂交系统对 Flt- 1的配体结合域进行筛选 .利用 PCR技术 ,从人胎盘 c DNA文库扩增出 4个截短的 Flt- 1 c DNA,分别含胞外第 2 ,1 - 2 ,2 - 3和 1 - 3个 loop,构建酵母双杂交系统融合表达质粒 ,并将 p GBT9/h VEGF165与 p GAD42 4 /Flt- 1 s两两配对转化酵母菌 SFY52 6,采用滤纸法和液体培养定量检测法对阳性克隆进行β-半乳糖苷酶活性分析 .结果显示 ,Flt- 1胞外 loop 2 - 3与 loop 1 - 3的配体结合能力相差不大 ,loop 1 - 2的结合力较弱 ,单独第 2个 loop无配体结合能力 .

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来源
《中国生物化学与分子生物学报》 |2001年第1期|40-45|共6页
作者
马骊; 张智清; 王小宁; 陈爱君; 姚立红; 姜忠良;
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作者单位

中国人民解放军第一军医大学分子免疫学研究所;

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正文语种 chi
中图分类肿瘤病理学、病因学;
关键词
血管内皮生长因子; 受体; 酵母双杂交; 晶体结构; 肿瘤组织;

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