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Claudin-7可诱导性条件性基因敲除小鼠模型的构建和鉴定

         

摘要

目的:应用Cre-Loxp系统构建Claudin-7蛋白在肠道可诱导性条件性基因敲除小鼠模型,并进行表型分析.方法:构建Claudin-7打靶载体,通过电击法转染入小鼠胚胎干细胞(ES细胞),用正负筛选法筛选阳性ES细胞并进行PCR鉴定和Southern鉴定,利用显微注射把发生正确同源重组的ES细胞注射进C57BL/6N小鼠囊胚,移入受体小鼠子宫以获得嵌合体小鼠.将得到的嵌合体小鼠与C57BL/6N小鼠交配获得Claudin-7-flox小鼠,该小鼠与PvillinCre ERT2转基因小鼠杂交,通过子代自交获得Claudin-7在肠道可诱导性条件性基因敲除(Cldn7fl/fl Villin-Cre ERT2)的小鼠,他莫昔芬(tamoxifen)药物诱导肠道Claudin-7基因敲除,对小鼠进行表型分析.结果:获得Claudin-7-flox小鼠及Claudin-7肠道可诱导性条件性基因敲除小鼠数只,Claudin-7肠道可诱导性条件性基因敲除小鼠出生时表型正常,发育良好,他莫昔芬(tamoxifen)药物应用后,诱导了小鼠肠道上皮细胞Claudin-7基因表达的缺失.小鼠出现脱水表现,活泼度降低,并出现死亡.结论:成功构建了Claudin-7肠道可诱导性条件性基因敲除小鼠模型,利用他莫昔芬诱导肠道Claudin-7基因敲除,初步构建了肠道炎症模型,为进一步研究Claudin-7在肠道肿瘤中的作用奠定了基础.

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