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HPLC-DAD-TOF/MS法测定小柴胡汤中柴胡皂苷a、黄芩苷和甘草酸的含量

         
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目的:建立小柴胡汤药材中柴胡皂苷a、黄芩苷和甘草酸含量测定的方法。方法:采用HPLC-DAD-TOF/MS,Agilent Zorbax XDB-C18柱(2.1 mm×50 mm,1.8μm),水(0.025%甲酸)-甲醇(0.025%甲酸)为流动相,梯度洗脱,流速为0.15 ml·min^(-1),柱温为25℃,进样量0.25μl;质谱条件为电喷雾电离源(ESI),正离子监测,毛细管电压为4000 V,干燥气流速为10.0 L·min^(-1),干燥气温度为350℃,雾化器压力为40 psi(275792 Pa),裂解器电压为200 V,用于定量分析的柴胡皂苷a离子为m/z 803.4200～803.4900。黄芩苷和甘草酸检测波长分别是275 nm和250 nm。结果:柴胡皂苷a线性范围为0.2116～127.3μg·ml^(-1),线性方程为Y=461182X+2000000(r=0.9990)。黄芩苷线性范围为0.758～455μg·ml^(-1),线性方程Y=5.9789X-27.418(r=0.9995)。甘草酸单铵盐线性范围为2.268-136.8μg·ml^(-1),线性方程Y=0.9499X- 1.0464(r=0.9995)。高、中、低浓度的柴胡皂苷a平均回收率分别为(95.54±1.60)%、(99.39±3.97)%、(103.8±1.97)%和黄芩苷平均回收率分别为(102.3±0.47)%、(100.9±1.32)%、(97.15±2.10)%及甘草酸单铵盐平均回收率分别为(102.6±1.96)%、(100.3±3.12)%、(97.75±1.25)%。日内、日间RSD均<5%,21 d内稳定性试验结果表明RSD均<5%。小柴胡汤中柴胡皂苷a、黄芩苷和甘草酸的含量分别为0.7500、10.65和2.572 mg/g。结论:该方法简便、灵敏、快速、准确,适用于小柴胡汤的质量控制。

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