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酵母双杂交技术筛选肝细胞中与乙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白C-12相互作用蛋白的研究

         
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目的:筛选并克隆人肝细胞中与 HBcAg 肝细胞结合蛋白 C-12新基因相互作用蛋白的基因,进一步探讨 HBcAg 结合蛋白 C-12新基因的生物学功能.方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增 C-12基因,连接入酵母表达载体 pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝 cDNA 文库质粒pACT2的酵母细胞 Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和 X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落并测序,进行生物信息学分析.结果:成功克隆出 C-12基因并在酵母细胞中表达,配合后选出既能在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基又能在铺有X-α-gal 的四缺培养基上生长,并变成蓝色的真阳性菌落21个,其中含金属硫蛋白 A2基因的菌落有3个、组织蛋白酶 B 基因1个、载脂蛋白 M 基因1个、细胞色素 C 氧化酶Ⅱ基因3个、人类受体蛋白酪氨酸激酶变异因子基因1个、KH 型剪接调控蛋白基因1个、磷脂酰肌醇脱酰酶聚糖Q 转录变异因子1基因1个、铁蛋白轻链基因2个、鸟氨酸脱羧酶1基因1个、血液凝固因子Ⅸ基因1个、乙酰乳酸合酶基因1个、钙激活蛋白酶基因1个、核外三磷酸盐双磷脂酰水解酶5基因1个、血浆α-球蛋白抑制因子 H4基因1个和未知蛋白基因2个.结论:成功克隆出乙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白 C-12新基因相互作用蛋白的编码基因,为进一步研究 HBcAg 在病毒装配、损害肝细胞、感染致病等方面的具体作用提供 (?)新线索.

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