猪γ-干扰素双顺反子表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达

曹瑞兵; 蔡梅红; 陈德胜; 陈溥言

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猪γ-干扰素双顺反子表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达

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提取经 Con A诱导培养的猪外周血白细胞总 RNA,RT- PCR扩增出猪 IFN- γ基因并克隆到 p GEM- T- easy载体 ,测序结果表明 ,扩增片段为含有信号肽的猪 IFN-γ完整基因。亚克隆猪 IFN-γ成熟蛋白编码基因 ,并对其 5′段前 2个稀有密码子进行大肠杆菌偏嗜性改造。通过引入 SD序列 ,成功构建了猪 IFN- γ原核双顺反子表达载体 p L CS-po IFN2 G,并实现了猪 IFN-γ在大肠杆菌中的高表达 ,约占菌体总蛋白的 5 6 .5 %。表达产物以包涵体形式存在 ,用含 7mol/L 盐酸胍的变性液溶解及含 0 .5 mol/L盐酸胍复性液复性处理 ,复性后的表达产物经凝胶层析纯化后 ,细胞病变抑制法测定结果表明 ,重组猪

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来源
《中国兽医学报》 |2004年第1期|52-55|共4页
作者
曹瑞兵; 蔡梅红; 陈德胜; 陈溥言;
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作者单位

南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因的表达;猪;
关键词
猪γ—干扰素; 双顺反子; 表达载体; 大肠杆菌; 基因表达; 基因克隆;

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