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结核分枝杆菌H_(37)Rv株Rv0341编码基因iniB的克隆与表达

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目的克隆并表达编码结核分枝杆菌H37Rv株Rv0341蛋白的iniB基因。方法利用PCR从结核分枝杆菌H37Rv株中扩增iniB基因,克隆于pET-22b(+)原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,镍离子亲和层析柱纯化后,通过SDS-PAGE和Western-blot鉴定目的蛋白的表达及反应原性。结果克隆并表达了iniB基因,表达的蛋白相对分子质量约43000,诱导2h表达量较高,约为25%。目的蛋白主要以包涵体形式存在于超声沉淀中,纯化后蛋白纯度可达98%以上。经Western blot检测,纯化蛋白与依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)肺结核患者血清呈现强阳性反应,而与非依R菌肺结核患者血清不反应。结论已成功克隆并表达了编码结核分枝杆菌H37Rv株Rv0341蛋白的iniB基因,表达的重组蛋白具有反应原性及特异性,为依R菌结核病临床血清学快速诊断方法的建立及试剂盒的研发奠定了基础。

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来源
《中国生物制品学杂志》 |2008年第7期|557-559|共4页
作者
吴园; 钟敏; 王易伟; 钟静; 胡频频; 毛旭虎;
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作者单位

第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心;

重庆市肺科医院暨重庆市结核基因诊断中心实验室;

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正文语种 chi
中图分类基因的表达;
关键词
结核分枝杆菌; H37Rv株; Rv0341蛋白; iniB基因; 克隆; 表达;

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