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转玉米C_4型pepc水稻成熟胚为外植体的水稻悬浮细胞系的优化

         

摘要

为了研究外源玉米光合作用关键酶C4型磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvate carboxylase,PEPC)基因在C3植物水稻中提高光合效率的分子机理,本研究以高表达玉米C4型pepc水稻(PC)和未转基因野生型Kitaake(WT)为材料,探索高效且稳定水稻悬浮细胞系建立的方法。结果表明:PC成熟胚愈伤组织的诱导培养基中添加2mg/L2,4-D和1mg/L6-BA,可出诱导出高频的愈伤组织;再通过3次继代培养(2~0.5mg/L2,4-D,2~0.2mg/L6-BA,1mg/LABA),逐步降低2,4-D和6-BA的浓度,可获得了疏松、颗粒状且分散的愈伤组织块;然后转接到水稻悬浮细胞液体培养基中(0.5mg/L2,4-D,0.2mg/L6-BA和1mg/LABA),在28℃下培养,新原液的比例为3:1,经42d,可建立稳定且高效的供试水稻悬浮细胞系。

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