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首页> 中文期刊> 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 >间质干细胞培养上清对日本血吸虫SEA诱导活化的巨噬细胞株RAW264.7的抑制作用

间质干细胞培养上清对日本血吸虫SEA诱导活化的巨噬细胞株RAW264.7的抑制作用

         
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目的观察大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)培养上清对日本血吸虫可溶性虫卵抗原(soluble egg antigen,SEA)诱导活化的巨噬细胞的抑制作用。方法用5、10、20和40μg/ml SEA分别诱导巨噬细胞株RAW264.7 12 h,或用20μg/ml SEA分别诱导小鼠巨噬细胞株(RAW264.7)4、8、12和24 h后,用实时荧光定量PCR检测α肿瘤坏死因子(TNF-α)的mRNA水平,选择SEA的最佳作用浓度和作用时间。将巨噬细胞分成5组,分别为阴性对照组、SEA组、SEA+MSC上清组(MSC组)、SEA+大鼠肾小管上皮细胞株(NRK-52E)上清组(NRK-52E组)和SEA+DMEM细胞培养基组(DMEM组)。除阴性对照组外,其他各组给予20μg/ml SEA诱导巨噬细胞活化12 h后,MSC组、NRK-52E组和DMEM组换液撤SEA,分别给予MSC培养上清、NRK-52E细胞培养上清和DMEM培养液,继续培养。显微镜观察细胞上清培养12 h后各组细胞形态。实时荧光定量PCR检测细胞上清培养12 h和24 h后TNF-αmRNA水平。蛋白质印迹(Western blotting)分析检测细胞上清培养12 h后转化生长因子β1(TGF-β1)的蛋白表达水平。噻唑蓝比色法(MTT法)测定细胞上清培养24 h和48 h后巨噬细胞增殖情况。结果 SEA活化巨噬细胞的最佳浓度和时间分别为20μg/ml和12 h。镜下观察显示,MSC上清培养12 h后,MSC组与SEA组、NRK-52E组和DMEM组相比,细胞变圆,体积明显较小,伪足较少。MSC上清作用12 h和24 h后,MSC组TNF-αmRNA水平分别为阴性对照组的(1.0±0.4)和(1.0±0.5)倍,显著低于NRK-52E组[分别为(10.4±3.9)和(16.5±5.0)倍(12 h:P<0.05;24 h:P<0.01)]和DMEM组[分别为(6.0±2.1)和(2.4±0.7)倍(均P<0.05)]。MSC上清作用12 h后,MSC组蛋白TGF-β1/GAPDH为0.31±0.10,显著低于NRK-52E组(0.88±0.10,P<0.01)和DMEM组(0.58±0.06,P<0.05)。MSC上清作用48 h后,MSC组吸光度(A490值)为0.22±0.05,与NRK-52E组(0.53±0.02)和DMEM组(0.31±0.03)比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 MSC培养上清能抑制SEA诱导的巨噬细胞株RAW264.7活化。

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