人巨细胞病毒糖蛋白gB基因重组腺病毒载体的构建及包装

马超; 陈勇; 巩莉; 郭敏; 李萍; 蒋琳

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人巨细胞病毒糖蛋白gB基因重组腺病毒载体的构建及包装

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目的构建携带有人巨细胞病毒(HCMV)糖蛋白gB基因的重组腺病毒载体,并在HEK293细胞中进行包装。方法将gB基因克隆至穿梭质粒Track-CMV,构建重组质粒Track-CMV/gB,亚克隆至转移载体pAD-Easy-1,构建重组质粒pAD-Easy-1/gB,将该重组骨架质粒转染HEK293细胞,利用HEK293细胞产生重组腺病毒。空斑法及PCR法挑选重组病毒,荧光显微镜观察标志蛋白(绿色荧光蛋白)的表达,利用噬斑法检测病毒滴度。结果重组腺病毒载体经酶切鉴定证明构建正确,转染重组腺病毒载体的HEK293细胞经PCR扩增,可见约700bp的目的基因片段,荧光显微镜观察可见绿色荧光蛋白表达,空斑试验检测病毒滴度为2×106PFU/ml。结论已成功构建了含有gB基因的重组腺病毒载体,为进一步研制重组腺病毒载体HCMV疫苗提供了条件。

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来源
《中国生物制品学杂志》 |2008年第7期|575-578|共4页
作者
马超; 陈勇; 巩莉; 郭敏; 李萍; 蒋琳;
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作者单位

兰州生物制品研究所;

中国科学院兰州近代物理研究所;

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正文语种 chi
中图分类基因载体;
关键词
人巨细胞病毒; 糖蛋白gB基因; 腺病毒载体; 构建; 包装;

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