黑曲霉M00988菌株来源的降解赭曲霉毒素A羧肽酶基因的原核表达及其固定化

熊科; 支慧伟; 王小艺; 赵峙尧; 柳佳芸; 裴鹏刚; 邓蕾; 李秀婷

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黑曲霉M00988菌株具有降解赭曲霉毒素A(OTA)的作用。为了提高天然菌株的降解效率,将黑曲霉菌株中解毒的关键羧肽酶cp基因进行克隆,并原核重组表达该酶。通过优化得到最优的表达条件为培养2.5 h后加入1 mmol/L IPTG,诱导温度28℃,诱导时间20 h。粗酶液经镍柱纯化后得到解毒能力达30.03μg/mg的电泳级重组羧肽酶。之后,采用AB-8大孔树脂作为吸附载体,戊二醛为交联剂对酶进行复合固定化,得到最优固定化条件为吸附时间12 h、吸附温度37℃、戊二醛质量分数0.35%、交联时间1 h、交联温度25℃。固定化酶与游离酶相比,酶对底物的亲和力虽有所下降,但酶促反应最大速度(Vmax)没有显著下降,催化效率基本一致,表明对该酶进行吸附-交联复合固定化效果良好。对固定化前、后酶的二级结构的研究表明:酶经固定化后,α螺旋和无规则卷曲的含量有所上升,β折叠显著下降,β转角变化不明显。这说明酶经固定化后,部分β折叠链内氢键断裂,转变成为无规则结构或α螺旋结构,导致固定化酶对底物的亲和力较之前有所下降,而其Vmax与游离态酶基本一致,因此固定化酶与游离态酶的催化效率基本一致。本研究为羧肽酶降解OTA在工业上的固定化应用奠定了基础。

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来源
《中国食品学报》 |2019年第5期|66-75|共10页
作者
熊科; 支慧伟; 王小艺; 赵峙尧; 柳佳芸; 裴鹏刚; 邓蕾; 李秀婷;
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作者单位

北京工商大学北京食品营养与人类健康高精尖创新中心;

北京工商大学北京市食品添加剂工程技术研究中心;

北京工商大学北京市质量与安全重点实验室;

北京工商大学北京市风味化学重点实验室;

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正文语种 chi
中图分类植物油;
关键词
OTA; 羧肽酶; 重组表达; 酶复合固定化;

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