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内脏内胚层样END-2细胞体外诱导鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的实验研究

         

摘要

目的 探讨内脏内胚层样END-2细胞体外诱导胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)分化为心肌细胞的特征。方法 用鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEF)作为饲养层促进ESCs增殖并抑制其分化,先将ESCs悬浮培养形成2~3d的拟胚体(embryoid bodies,EBs),再和END-2细胞共培养诱导向心肌细胞分化。实验分4组。第1,2组EBs分别和END-2细胞或END-2细胞条件培养液共培养;第3组EBs和表面铺有一层琼脂糖的END-2细胞共培养;第4组自然分化组为对照组。相差显微镜下观察分化细胞的形态学变化,免疫细胞荧光技术检测心肌细胞特异性肌钙蛋白T(TnT)的表达;透射电镜观察分化心肌细胞的超微结构。结果 各实验组均可见自发节律性收缩的拟胚体。随着培养的延长。自发节律性收缩的拟胚体数目也增加,均表达心肌细胞特异性蛋白TnT,以及观察到心肌样超微结构。在和END-2细胞直接接触的诱导条件下,分化的细胞形态较单一。结论 END-2细胞通过分泌可溶性细胞因子可诱导ESCs向心肌细胞分化,直接接触在END-2细胞诱导作用中并不是必要的。但可诱导出较单一的细胞。

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