构建真核表达质粒载体pIRES2-EGFP-FLT3及其在脐血CD34^+细胞中的表达

张勇; 张林生; 郭朝华; 张红宾; 裴莉; 钟大平

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目的:构建真核表达的双顺反子质粒载体pIRES2-EGFP-FLT3配体,为研究Flt3配体对急性放射复合伤造血功能恢复作用提供实验物质基础。方法:实验于2003-05/09在第三军医大学劳动卫生教研室完成。先用SalⅠ和BglⅡ双酶切pUM VC3-hFLT3配体,得到全长的人FLT3配体序列(0.8kb),两端抹平后克隆至pIRES2-EGFP载体的BglⅡ位点。然后用NheⅠ和XhoⅠ酶切鉴定;最后用脂质体转染的方法将重组质粒转入脐血CD34+细胞中,经过G418筛选,在荧光显微镜下观察其表达。结果:①构建了双顺反子真核表达载体pIRES2-EGFP-FLT3。②重组质粒pIRES2-EGFP-FLT3能在脐血CD34+细胞中的表达,凝胶电泳和测序结果证明将FLT3cDNA亚克隆入pIRES2-EGFP内,荧光显微镜下可见脐血CD34+细胞胞体发出绿色荧光。③转染效率为10.3%。结论:①携带标记基因的双顺反子质粒载体pIRES2-EGFP-FLT3能稳定地转入真核细胞表达载体。②该质粒转染到分离纯化的脐血CD34+细胞中,并获得阳性转染细胞的克隆。

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来源
《中国组织工程研究》 |2005年第42期|4-5|共4页
作者
张勇; 张林生; 郭朝华; 张红宾; 裴莉; 钟大平;
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作者单位

解放军第三军医大学西南医院血液科;

解放军第三军医大学全军复合伤研究所;

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正文语种 chi
中图分类 R394.2;
关键词
抗原; CD34; 质粒; 转染;

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