兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的功能性表达、纯化及活性鉴定

谢健平; 刘戈飞; 宋旭红; 杜昆; 李蕊; 梁斌; 张巧霞; 黄东阳

首页> 中文期刊> 《汕头大学医学院学报》 >兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的功能性表达、纯化及活性鉴定

兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的功能性表达、纯化及活性鉴定

开具论文收录证明 >>

期刊封面封底目录下载 >>

文献代查 >>

页面导航

摘要
著录项
相似文献
相关主题

摘要

目的:用原核蛋白表达系统对兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)进行功能性表达,并对其活性进行鉴定。方法:从兔肝中克隆出NRDR全长序列,运用Gateway表达系统将其编码区序列构建到表达载体(pDEST 17)上,再转化到大肠杆菌(E.coli)(BL21-AI)中表达出兔NRDR蛋白并鉴定其表达形式;取工程菌裂解上清通过金属离子亲和层析纯化出目的蛋白,再运用反相高效液相色谱法(HPLC)测定该酶的Km值和Vmax值。结果:构建出含兔NRDR编码区(768 bp)的表达克隆,转化到BL21-AI中表达出氨基端含6×His标签的重组兔NRDR蛋白,诱导表达4 h后目的蛋白可占总蛋白量的41.4%;经一步亲和层析得到的兔NRDR纯度为97.2%,比活性提高了64倍;经HPLC测定,该酶对视黄醛的Km值为(4.55±0.33)μmol/L,Vmax为(0.307±0.065)μmol/(min.mg)。结论:应用pDEST 17可在BL21-AI中对兔肝NRDR进行高效的功能性表达。

著录项

来源
《汕头大学医学院学报》 |2007年第1期|10-14|共5页
作者
谢健平; 刘戈飞; 宋旭红; 杜昆; 李蕊; 梁斌; 张巧霞; 黄东阳;
展开▼
作者单位

汕头大学医学院分子生物学中心;

展开▼
原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;
关键词
辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶; 表达; 纯化; 类视黄醇代谢;

相似文献

中文文献
外文文献
专利

1. 抗兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶单克隆抗体的制备和鉴定 [J] . 杜牡丹 ,宋旭红 ,刘戈飞 . 癌变·畸变·突变 . 2008,第003期
2. 神经母细胞瘤辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的功能性表达与生物信息学分析 [J] . 刘戈飞 ,李一凡 ,宋旭红 . 医学分子生物学杂志 . 2006,第002期
3. 辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶及其选择性剪接亚型的表达与功能鉴定 [J] . 刘戈飞 ,黄东阳 . 军事医学 . 2006,第003期
4. 兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶多克隆抗体的制备 [J] . 谢健平 ,刘戈飞 ,宋旭红 . 汕头大学医学院学报 . 2009,第1期
5. 宫颈癌细胞中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶及其选择性剪接亚型真核表达载体的构建和表达 [J] . 宋旭红 ,李蕊 ,刘戈飞 . 汕头大学医学院学报 . 2008,第2期
6. Lysine 21突变对树干毕赤氏酵母木糖还原酶辅酶依赖性的影响 [C] . 曾琦锴 ,杜红丽 ,翟志臣 . 2008年中国工业生物技术发展高峰论坛 . 2008
7. 兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的表达、纯化、活性鉴定及多克隆抗体制备 [A] . 谢健平 . 2007

兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的功能性表达、纯化及活性鉴定

摘要

著录项

相似文献

相关主题

期刊订阅