新疆大麦条纹花叶病毒的研究 Ⅱ.病毒核酸cDAN的合成及克隆

吴世宣; 孙祖同; 蔡文启; 赵淑珍; 莽克强

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新疆大麦条纹花叶病毒的研究 Ⅱ.病毒核酸cDAN的合成及克隆

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本文采用改进的新技术从大麦条纹花叶病毒核酸合成互补脱氧核糖核酸,重组质粒及选择特异性克隆。由于技术的改进,简化了操作程序,提高了工作效率。我们以大麦条纹花叶病毒三个组分核酸混合物为模板,寡(dT)8为引物,合成cDNA第一条链,用Gubler和Hoffman缺口翻译法合成第二条链,采用加HindⅢ人工接头的方法将cDNA插入pUC 9质粒载体上,于大肠杆菌JM-103中进行克隆,并以克隆颜色变化表示有无β-半乳糖苷酶活性的直观法,选择含有外源DNA的克隆。再以克隆原位分子杂交法检查克隆对病毒RNA各组分的特异性。仅对RNA_1或RNA_2有特异性的克隆,分别称为pBV_1和pBV_2,另有相当数量的克隆既与RNA_2也与RNA_3杂交,所以称为pBV2+3。用HindⅢ内切酶对一部分RNA_3杂交阳性的PBV2+3进行分析表明,插入的外源基因长度在500～1,000碱基对之间。文中讨论了RNA_2与RNA_3存在同源的可能性。

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来源
《病毒学报》 |1985年第3期|262-267|共6页
作者
吴世宣; 孙祖同; 蔡文启; 赵淑珍; 莽克强;
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作者单位

中国科学院微生物研究所;

南京大学;

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正文语种 chi
中图分类肿瘤学;
关键词
大麦条纹花叶病毒; 互补DNA; 重组DNA; 分子克隆;

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