大鼠骨骼肌多催化功能蛋白酶的提取、鉴定及其抗血清的制备

倪兵; 周建新; 董燕麟

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大鼠骨骼肌多催化功能蛋白酶的提取、鉴定及其抗血清的制备

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为了研究多催化功能蛋白酶（ｍｕｌｔｉｃａｔａｌｙｔｉｃａｌｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ，ＭＣＰ）在负氮平衡形成中的作用，以大鼠骨骼肌为原料，提取此酶并制备其抗血清．将大鼠骨骼肌粗提物经４５％～６５％饱和度硫酸铵分级盐析、阴离子交换层析和凝胶过滤，最后从Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ层析柱上获得单一活性洗脱峰．酶活性用Ｃａｒｂｏｂｅｎｚｏｘｙ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－４－ｎｉｔｒｉｎｉｌｉｄｅａｃｅｔａｔｅ作底物检测．非变性ＰＡＧＥ银盐染色显示单一区带的骨骼肌多催化功能蛋白酶，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银盐染色显示１０条亚基电泳区带，分子量在２５～３２ｋＤ之间．纯化的酶免疫兔８周后，抗血清效价达１３２，用分级盐析和离子交换层析纯化抗血清，显示单一电泳区带的ＩｇＧ．Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析显示只在２５～３２ｋＤ之间出现多条亚基区带．这些结果提示已获得电泳纯ＭＣＰ及其较高特异性的多克隆抗体．

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来源
《中国生物化学与分子生物学报》 |1998年第6期|736-741|共6页
作者
倪兵; 周建新; 董燕麟;
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作者单位

第三军医大学生物化学教研室;

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正文语种 chi
中图分类 Q550.3;
关键词
提纯; 抗血清; MCP;

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