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靶向融合防龋DNA疫苗编码蛋白靶向于人树突状细胞的体外研究

         
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目的:体外检测靶向融合防龋DNA疫苗pGJA-P/VAX1编码蛋白的生物学活性,研究蛋白是否具有靶向于抗原递呈细胞如树突状细胞的能力。方法:pGJA-P/VAX1和pVAX1分别转染真核细胞COS-7,收集并浓缩细胞培养上清。利用双抗夹心法,以人的IgG为标准品,检测上清及浓缩液中pGJA-P/VAX1编码蛋白的含量。体外培养人外周血来源的树突状细胞,与两种上清浓缩液孵育一段时间后,通过流式细胞术检测树突状细胞是否结合编码蛋白。实验分A、B、C组,A组树突状细胞与VAX1浓缩液作用,B组中树突状细胞与GJA-P/VAX1浓缩液作用,C组中树突状细胞表面B7分子首先被B7-1和B7-2的单克隆抗体封闭,然后与GJA-P/VAX1浓缩液作用。结果:pGJA-P/VAX1转染细胞后,培养上清的浓缩液中蛋白浓度相当于0.22μg/mL人的IgG。而pVAX1转染上清及浓缩液均未有蛋白检出。流式结果显示B组细胞平均荧光强度及细胞表面编码蛋白阳性率明显高于A组和C组。B组相对A组和C组,细胞直方图峰向右偏移。A、C两组细胞平均荧光强度近似,且两组细胞直方图近乎重合。结论:靶向融合防龋DNA疫苗编码的融合蛋白保持了CTLA-4的活性,可通过B7分子靶向结合树突状细胞。

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