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含HIV-1 gag、gag V3基因的重组腺病毒伴随病毒的构建及其免疫原性的研究

         

摘要

将HIV - 1中国株 42 (B亚型 )的 gag 基因及 gag与 gp12 0V3区的嵌合基因 gagV3插入腺病毒伴随病毒(AAV)表达载体pSNAV质粒中 ,构建重组质粒 pSNAV gag及pSNAV gagV3;采用脂质体转染的方法分别将重组质粒转入BHK细胞 ,G418筛选得到转入重组质粒并能表达外源基因的细胞系 ,命名为BHK gag及BHK gagV3。用具有重组腺病毒伴随病毒 (rAAV)包装功能的一种重组单纯疱疹病毒 (rHSV)分别感染这两株细胞系 ,纯化后得到rAAV ,电镜观察可见到大量实心病毒颗粒 ,核酸杂交检测重组病毒滴度达到 10 12 病毒颗粒 /ml,重组病毒感染2 93细胞 ,ELISA检测有 gag 及 gagV3基因的表达。用重组病毒免疫Balb/C小鼠 ,检测抗体及细胞免疫水平 ,证明重组病毒可以在小鼠体内诱导产生细胞及体液免疫。

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