鼠抑铁素2蛋白的原核表达及鉴定

王爽; 朱道银; 帖儒修; 李娜; 王瑜伟

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鼠抑铁素2蛋白的原核表达及鉴定

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目的表达鼠抑铁素2(lcn2)蛋白,并检测表达产物的生物学活性。方法从小鼠RAW264.7巨噬细胞提取总RNA,逆转录合成cDNA,以cDNA为模板,PCR扩增lcn2基因片段,插入原核表达质粒pET-32a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,用IPTG诱导表达。表达产物经His-tagin-gel stain鉴定后,采用Ni2+-NTA亲和层析纯化,并检测其生物学活性。结果经核苷酸序列测定和酶切鉴定,表明重组质粒pET-32a(+)-lcn2构建正确。表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析,相对分子质量约为21000,表达量占菌体总蛋白的35%,主要以包涵体形式存在。纯化后蛋白浓度为1.0g/L,并对大肠杆菌和乙型链球菌生长有一定的抑制作用。结论成功地在原核细胞中表达了重组lcn2蛋白,且表达的蛋白具有一定的抑菌作用。

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来源
《中国生物制品学杂志》 |2008年第8期|679-682|共4页
作者
王爽; 朱道银; 帖儒修; 李娜; 王瑜伟;
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作者单位

重庆医科大学免疫学教研室;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因的表达;
关键词
抑铁素2; 基因克隆; 原核表达; 生物学活性;

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