白喉毒素无毒变异体CRM_(197)的表达及其载体作用

王春娥; 叶强; 李凤祥

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白喉毒素无毒变异体CRM_(197)的表达及其载体作用

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目的表达白喉毒素无毒变异体CRM197,并考察其载体作用。方法利用基因工程技术在大肠杆菌BL21(DE3)中表达CRM197,用金属镍离子亲和层析纯化;以重组CRM197为蛋白载体,在EDAC的作用下,与活化的A群脑膜炎球菌荚膜多糖(GAMP)结合,制备GAMP-rCRM197结合物,免疫BALB/c小鼠,间接ELISA法测定血清中A群脑膜炎球菌多糖特异性IgG抗体,并分析其免疫原性。结果重组CRM197在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的25%左右;Western blot证明重组CRM197具有良好的反应原性;各针接种后,结合物诱生的多糖特异性IgG水平均显著高于GAMP组和GAMP+rCRM197混合物组,具有较强的免疫原性;多次接种产生了免疫增强效应,重组CRM197具有载体蛋白的作用。结论已在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达了重组CRM197,以纯化的重组CRM197作为载体制备的GAMP-rCRM197结合物具有良好的免疫原性,为以重组CRM197为蛋白载体制备其他结合疫苗奠定了实验基础。

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来源
《中国生物制品学杂志》 |2008年第8期|687-691|共5页
作者
王春娥; 叶强; 李凤祥;
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作者单位

中国药品生物制品检定所菌种室;

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正文语种 chi
中图分类基因的表达;
关键词
白喉毒素; 无毒变异体; CRM197; 载体蛋白; 结合疫苗; A群脑膜炎球菌;

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