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RNA干扰技术抑制EMMPRIN表达对人绒癌细胞JEG-3侵袭性的实验研究

         

摘要

目的研究RNA干扰技术抑制人绒癌JEG-3细胞EMMPRIN的表达,探讨EMMPRIN在滋养细胞侵袭行为中的作用。方法设计、体外化学合成靶向EMMPRIN的短发夹状双链RNA(shRNA),分别与脂质体LipofectamineTM2000结合后转染体外培养的人绒癌细胞系JEG-3。分为A实验组:每组中加入1μg重组质粒和5μl阳离子脂质体Metafectene;B阴性对照组:只加5μl脂质体转染试剂;C无关对照组(无关dsRNA对照组,载体试剂盒自带)。三组细胞孵育48h后,Western blot和RT-PCR技术检测EMMPRIN蛋白和mRNA的表达,明胶酶谱测定MMP2,9的表达。结果RNA干扰技术可以显著的靶向抑制EMMPRIN基因在人绒癌细胞中的表达,与B组和C组相比,A组细胞EMMPRIN蛋白和EMMPRINmRNA表达分别减少了75.2%和62.3%(P0.05);A组细胞在转染后的12,24,36,48小时MMP2的分泌分别下降了13.5%,29.6%,58.3%和66.6%;MMP9的分泌分别下降了10.7%,33.8%,47.5%和62.6%,相邻组间比较差异显著(P<0.05)。结论EMMPRIN与滋养细胞的侵袭功能密切相关,抑制滋养细胞中EMMPRIN的表达可以抑制滋养细胞的侵袭。

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