葡萄球菌肠毒素A和黑色素瘤抗原A3基因重组真核共表达载体的构建及其在293T细胞的表达

吉晓滨; 吕景礼; 陈敬贤; 刘启才; 谢景华

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目的构建葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal endotoxinA,SEA)和喉癌来源的黑色素瘤抗原A3(melanoma-associated antigenA3,MAGE-A3)基因共表达的真核表达载体,检测、鉴定其在293T细胞中的表达情况。方法分别用RT-PCR方法及人工化学合成法获得MAGE-A3和SEA基因片段,然后依次将MAGE-A3和SEA基因克隆至含内部核糖体进入位点的真核表达载体IRES序列的上、下游,构建成重组质粒pMGEA3-IRES-SEA。经脂质体转染至293T细胞以后,用荧光定量PCR、蛋白免疫印迹分别鉴定SEA和MAGE-A3基因的表达。结果限制性内切酶酶切分析证实MAGE-A3和SEA基因均正确地克隆在pMAGEA3-IRES-SEA中,基因测序结果与GenBank公布的MAGE-A3、SEA序列完全一致,实现了双基因的正确重组。重组质粒转染293T细胞后能检测到MAGE-A3、SEA基因的高水平的有效表达。稳定表达双基因的293T细胞上清对外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)增殖有促进作用,与细胞中SEA的表达和分泌有关。结论成功地构建了pMAGEA3-IRES-SEA真核表达质粒,并能在293T细胞中有效表达MAGE-A3和SEA蛋白,由此奠定了其作为抗喉癌DNA疫苗应用的基础。

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来源
《中国耳鼻咽喉头颈外科》 |2012年第7期|349-353|共5页
作者
吉晓滨; 吕景礼; 陈敬贤; 刘启才; 谢景华;
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作者单位

广州市第一人民医院耳鼻咽喉科;

广州医学院实验医学研究中心;

美国哥伦比亚大学医学院病理与细胞生物系;

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正文语种 chi
中图分类 R378.11;
关键词
葡萄球菌属; 超抗原; 真核细胞; 基因; 喉肿瘤; 克隆; 分子;

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