单细胞水平β地中海贫血基因突变检测技术的实验研究

易萍; 李力; 邓兵; 姚宏; 陈竹钦

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目的　探讨在单个淋巴细胞水平能否同时检测β地中海贫血多个突变。方法　将我国β地中海贫血常见8种突变点(CD4 1- 4 2、IVS -Ⅱ- 6 5 4、CD17、TATAboxnt - 2 8、CD71- 72、TATAboxnt - 2 9、CD2 6、IVS -Ⅰ- 5 )的等位特异性寡核苷酸(allelespecificoligonucleiotide ,ASO)探针点样于尼龙膜上,制备β地中海贫血常见突变诊断膜条。应用蛋白酶裂解法处理单个细胞,采用15个碱基的随机引物对单个细胞的基因组进行引物延伸预扩增(primerextensionpreamplification ,PEP) ,取其产物5 μl分别对β地中海贫血的目的基因片段进行巢式或半巢式PCR扩增与生物素标记,然后采用β地中海贫血常见突变诊断膜条与标记产物进行反向斑点杂交(reversedotblot,RDB)检测β地中海贫血突变型。结果　使用显微操作法分别从1例正常女性及4例β地中海贫血血标本中获得3个淋巴细胞。采用Rechitsky等的蛋白酶K裂解法处理单个淋巴细胞,扩增效率为93.3% ,等位基因脱扣率为6 .7%。RDB杂交后结果显示与预料的相符,其基因型依次为N/N、CD17(A→T) /N、IVS-Ⅱ- 6 5 4 (C→T) /CD17(A→T)、CD4 1- 4 2 (-CTTT) /N、TATAboxnt - 2 8(A→G) /N。结论　在单细胞水平应用PEP及RDB技术可以同时检测β地中海贫血多个突变,操作相对简便,为胚胎植?

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来源
《中国优生与遗传杂志》 |2005年第4期|19-21|共3页
作者
易萍; 李力; 邓兵; 姚宏; 陈竹钦;
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作者单位

第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科;

重庆医科大学附属儿童医院;

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正文语种 chi
中图分类 R556.61;
关键词
单细胞; β地中海贫血; 基因突变; 检测技术; 实验研究;

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