用Bac-to-Bac杆状病毒系统表达人生长激素

耿朝晖; 郜鹏; 刘莹; 赵东明; 张宝珠; 俞新大; 李建民

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用Bac-to-Bac杆状病毒系统表达人生长激素

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利用Bac to Bac杆状病毒载体表达系统将人生长激素 (humangrowthhormone ,hGH)基因cDNA克隆至转移载体pFastBac1中 ,得到pFastBac hGH ,再将其转化进入含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac中 ,发生转座作用 ,得到含hGH基因的重组穿梭载体rBacmid hGH .纯化DNA ,直接转染培养的昆虫细胞Sf9,得到重组病毒rAcV Bac hGH .经酶切PCR及Southern杂交鉴定 ,hGH基因正确地插入病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下 ,SDS PAGE测得产物蛋白分子量为 2 2kD左右 .用免疫化学发光法测得转染上清中hGH表达水平可达 18μg ml ,与用传统的BEVS表达hGH相比 ,转染上清中hGH表达水平提高 4 0

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来源
《中国生物化学与分子生物学报》 |2002年第1期|59-63|共5页
作者
耿朝晖; 郜鹏; 刘莹; 赵东明; 张宝珠; 俞新大; 李建民;
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作者单位

南开大学生物化学及分子生物学系;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;
关键词
Bac-to-Bac系统; 昆虫细胞; hGH; 基因表达; 杆状病毒; 生长激素;

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